






原位杂交杂交液
(一)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛白蛋白及载体dna或rna等。
(二)杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。
(三)贾---可使杂交温度降低,所以杂交液中加入适量的---胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。
(四)---葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,原位杂交公司,以达到提高杂交率的目的。

将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。
杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×ssc和0.1% sds溶液中,轻轻振摇5分钟,染色体原位杂交,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次,原位杂交,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
原位杂交(in situ hybridization)是指将特定标记的已知---序列为探针与细胞或组织切片中---进行杂交,从而对特定---序列进行定量定位的过程。这个技术可以用于研究细胞或组织中特定基因或dna序列的表达和定位,从而帮助研究者深入理解和探究生物学过程。原位杂交有几种不同的类型,包括荧光原位杂交和其他用于基因表达分析的方法。

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