荧光原位杂交-贝科新肽(商家)

原位杂交杂交液

（一）杂交液内除含一定浓度的标记探针外，还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛白蛋白及载体dna或rna等。

（二）杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加，可以减低探针与组织标本之间的静电结合。

（三）贾---可使杂交温度降低，所以杂交液中加入适量的---胺，可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。

（四）---葡聚糖能与水结合，从而减少杂交液的有效容积，提高探针有效浓度，荧光原位杂交，以达到提高杂交率的目的。

原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的mabt溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlmabt置换，25分钟，再用1mlmabt溶液置换，一小时以上，后用1mlmabt溶液置换，25分钟。

2）        用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul bm purple ap substrate(底物，用之前加5mm左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用pbst洗两三次后加上4％---固定，拍照。

6）4c冰箱保存。