染色体原位杂交-武汉贝科新肽科技公司

　组织原位杂交(tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术

　　原位杂交技术的基本原理

　　利用---分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，染色体原位杂交，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。

　　1.两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子

　　2.应用带有标记的（有性同位素，如3h、35s、32p，荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针，与组织切片或细胞内待测---(rna或dna）片段进行杂交

　　3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位

　　用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。

　　此方法有---的敏感性和特---，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

根据---探针标记物的种类分别进行自显影或利用酶检测系统进行不同显色处理。细胞或组织的原位杂交切片在显示后均可进行半定量的测定，如自显影可利用人工或计算机辅助的图象分析检测仪（computer-assisted image ---ysis）检测银粒的数量和分布的差异。非性---探针杂交的细胞或组织可利用酶检测系统显色，然后利用显微分光光度计或图像分析仪对不同类型和数量的---的显色强度进行检测。

将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。

杂交结束后，去除杂交液，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×ssc和0.1% sds溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

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