把滤膜放在纸巾上于室温晾干后，把滤膜（编号面朝上）放在一张保鲜膜上，并在保鲜膜上作几个不对称的标记，以使滤膜与性自显影片位置对应。
用第二张保鲜膜盖住滤膜。加光片并加上增感屏于-70℃---12-16小时。
底片显---，在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置，同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸，通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。
在ishh，整个实验周期是比较长的，实验程序也比较繁杂，而杂交在ishh整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中---探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此，杂交是ishh中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上，动物组织原位杂交，加盖硅化的盖玻片，防止孵育过程中的高温（50℃左右）导致杂交液的蒸发。为---杂交所需的湿润环境，可将其放在盛有少量5×ssc或2×ssc（standard saline citrate， ssc）溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同，所不同的是加入了标记的---探针和---葡聚糖。
原位杂交是一种生物学技术，它可以在细胞或组织中特定部位检测dna或rna的存在，而不需要将dna或rna分离出来。这项技术使用标记的dna或rna探针，与细胞或组织中的相应dna或rna进行特---结合，然后通过光学显微镜或电子显微镜观察探针的位置和数量。
原位杂交的原理很简单。dna或rna分子具有互补的核苷酸序列，因此可以通过氢键相互结合。将标记的dna或rna探针与细胞中的dna或rna进行杂交，可以特---地检测这些探针的位置和数量。探针的数量和位置可以反映dna或rna在细胞中的水平和分布。
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