






荧光原位杂交(fish)技术具有以下优点:
可多重染色:利用不同的荧光染料标记不同的探针,可以实现多重荧光原位杂交,从而同时检测多个序列,提高实验效率了。
高度---性和性:fish技术不仅可以用于研究已知基因或序列的染色体定位,还可以用于未基因或遗传标记及染色体畸变的研究,在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。
组织原位杂交(tissue in situ hybridization),即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术
原位杂交技术的基本原理
利用---分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。
1.两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子
2.应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p,荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交
3.用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位
用原位杂交术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
此方法有---的敏感性和特---,可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面:
1. 制备组织样品:从植物中取出需要研究的组织样品,如根、茎、叶等。
2. 固定组织样品:将组织样品固定在载玻片上,通常使用或---等化学物质进行固定。
3. 处理组织样品:对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理,以便于dna探针的穿透和结合。
4. 制备dna探针:根据需要研究的基因序列,gish,设计并合成dna探针。dna探针可以标记荧光染料或性同位素,以便于检测。
5. 杂交dna探针:将dna探针与组织样品进行杂交,通常需要在高温下进行,以便于dna探针与rna或dna结合。
6. 检测杂交信号:通过荧光显微镜或计数器等设备,检测dna探针与rna或dna的结合情况,确定目标基因的表达模式和位置。

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