原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-荧光原位杂交

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），植物原位杂交，使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，原位杂交公司，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，原位杂交，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，荧光原位杂交，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

原位杂交技术可以应用于以下场景：

组织中---dna/rna的检测和定位。例如，可以用于检测eb---mrna、人类状瘤---和巨细胞---dna等。

癌基因、抑癌基因及其他各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。

在植物基因组研究中的应用。例如，通过与特定基因序列的探针进行杂交，可以在植物染色体上定位到目标基因的位置，进而构建遗传图谱，为植物育种和基因组研究提供基础数据。