染色体原位杂交-武汉贝科新肽公司

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    2024-7-27

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原位杂交第二天

1.

1)将探针回收,放于-20c保存(通常探针可重复使用十次左右)。

2)加入50%---胺/2xssct溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。

3)置换2xssct1ml,60℃,染色体原位杂交,放置15分钟。

4)置换0.2xssct1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。

2.

1)用mabt洗两次,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。

2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。

3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4c 冰箱过夜。







 组织原位杂交(tissue in situ hybridization),即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术

  原位杂交技术的基本原理

  利用---分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。

  1.两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子

  2.应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p,荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交

  3.用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位

  用原位杂交术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。

  此方法有---的敏感性和特---,可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。





原位杂交技术(in situhybridization)是以标记的---分子为探针,在组织细胞原位检测特异---分子的技术。使含有特异序列、经过标记的---单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补---单链即靶---发生杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的dna或rna分子。

可以检测crna、mirna、lnrna、dna。可以各种种属的标本,包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。





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