同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素：温度、光照、湿度和试剂的ph值。温度和湿度直接影响着探针和目标dna的杂交效率；光照影响着荧光染料的强度，所以探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存；各种试剂ph也要达到要求，这也直接关系到原位杂交的稳定性。
组织原位杂交(tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术
原位杂交技术的基本原理
利用---分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。
1.两条核苷酸单链片段，染色体原位杂交，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成dna-dna、dna一rna或rna一rna双键分子
2.应用带有标记的（有性同位素，如3h、35s、32p，荧光素、生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针，与组织切片或细胞内待测---(rna或dna）片段进行杂交
3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mrna或dna的存在与定位
用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
此方法有---的敏感性和特---，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
这一原理对于检测一个特异的mrna在某一种生物体，或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期，由于---分子杂交的特---高，并可定位，因此该技术已被广泛应用，例如与细胞内rna进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内dna或rna研究更为方便；同时由于原位杂交不需要从组织中提取---，对于组织中含量极低的靶序列有---的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。
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