原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-动物组织原位杂交

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    2023-10-12

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基因组原位杂交技术基因组原位杂交(genome in situ hybridization,gish)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。它主要是利用物种之间dna同源性的差异,动物组织原位杂交,用另一物种的基因组dna以适当的浓度作封阻,gish,在靶染色体上进行原位杂交。gish技术初应用于动物方面的研究(pinkel et al.,植物组织原位杂交,1986),在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。



在ishh,整个实验周期是比较长的,实验程序也比较繁杂,而杂交在ishh整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中---探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此,杂交是ishh中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上,加盖硅化的盖玻片,防止孵育过程中的高温(50℃左右)导致杂交液的蒸发。为---杂交所需的湿润环境,可将其放在盛有少量5×ssc或2×ssc(standard saline citrate, ssc)溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同,所不同的是加入了标记的---探针和---葡聚糖。



fish是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,原位杂交,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。



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