一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，gish，加入50%的pbst溶液，放置5分钟。
2） 置换成30％的pbst溶液，放置5分钟
3） 置换成pbst溶液，放置5分钟，重复一次
4） 置换成4％---的pbs溶液固定20分钟
5） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。
蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。
2） 用pbst溶液轻洗，在pbst中放置5分钟。
3） 用4％---的pbs溶液固定20分钟，室温。
4） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。
---原位杂交可根据其检测物而分为细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交；根据其所用探针及所要检测---的不同又可分为dna-dna， rna-dna， rna-rna杂交。但不论哪种杂交都必须经过组织细胞的固定，预杂交，杂交，冲等一系列洗步骤及自显影或酶法显色以显示杂交结果。
我们在这儿介绍的是整胚原位杂交，不同于一般的在载片上对细胞和组织切片进行探针杂交及检测的原位杂交，
原位杂交：
原位杂交是指用特定探针定位、检测dna、rna的一种有效的实验方法，通过把特点序列客隆到特殊载体上，通过转录酶反转一条天然的rna探针，将探针和切片样品进行杂交，通过一系列显色方法，来确定rna或者dna表达区域；本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记，灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒，gish/ish/fish按照探针进行收费，每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片，收费为1万5千元，gish杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量---！
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