原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-植物原位杂交

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，原位杂交，展平保鲜膜，原位杂交技术，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，荧光原位杂交，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，植物原位杂交，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面：

1. 制备组织样品：从植物中取出需要研究的组织样品，如根、茎、叶等。

2. 固定组织样品：将组织样品固定在载玻片上，通常使用或---等化学物质进行固定。

3. 处理组织样品：对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理，以便于dna探针的穿透和结合。

4. 制备dna探针：根据需要研究的基因序列，设计并合成dna探针。dna探针可以标记荧光染料或性同位素，以便于检测。

5. 杂交dna探针：将dna探针与组织样品进行杂交，通常需要在高温下进行，以便于dna探针与rna或dna结合。

6. 检测杂交信号：通过荧光显微镜或计数器等设备，检测dna探针与rna或dna的结合情况，确定目标基因的表达模式和位置。