






原位杂交杂交液
(一)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛白蛋白及载体dna或rna等。
(二)杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。
(三)贾---可使杂交温度降低,所以杂交液中加入适量的---胺,原位杂交,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。
(四)---葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,gish,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的。

原位杂交技术的技术流程
原位杂交技术的技术流程包括样本处理、探针制备、杂交反应和信号检测等步骤。样本处理包括组织或细胞的固定、包埋、切片和脱氧核糖---酶---等步骤,ish,目的是保持组织或细胞的原始结构和---序列的完整性。探针制备包括标记探针、纯化和变性等步骤,目的是提高探针的特---和敏感性。杂交反应包括预杂交、杂交和洗脱等步骤,目的是使探针与目标---序列形成双链复合物。信号检测包括显色反应、荧光染色和性同位素标记等步骤,目的是可视化目标---序列的分布。
这一原理对于检测一个特异的mrna在某一种生物体,或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期,由于---分子杂交的特---高,并可定位,因此该技术已被广泛应用,例如与细胞内rna进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响,因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内dna或rna研究更为方便;同时由于原位杂交不需要从组织中提取---,对于组织中含量极低的靶序列有---的敏感性,并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

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