贝科新肽-原位杂交技术服务-原位杂交

一. 原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的pbst溶液，放置5分钟。

2） 置换成30％的pbst溶液，放置5分钟

3） 置换成pbst溶液，原位杂交技术服务，放置5分钟，重复一次

4） 置换成4％---的pbs溶液固定20分钟

5） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。

 蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，原位杂交检测，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用pbst溶液轻洗，在pbst中放置5分钟。

3） 用4％---的pbs溶液固定20分钟，室温。

4） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，荧光原位杂交技术，室温。

植物原位杂交在遗传育种方面的应用主要包括：

检测物种或品种特---：通过植物原位杂交技术可以检测出不同物种或品种之间基因表达的差异，从而为物种或品种特---研究提供依据。

遗传育种：通过植物原位杂交技术可以检测到不同品种之间基因表达的差异，从而为遗传育种提供重要的参考信息。例如，通过将特定的外源基因导入到植物细胞中，然后利用原位杂交技术检测该基因在植物细胞中的位置和表达情况，为遗传育种提供重要的参考信息。

细胞特---mrna转录的定位，原位杂交，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；组织中---dna/rna的检测和定位，如eb---mrna、人类状瘤---和巨细胞---dna的检测；癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；基因在染色体上的定位；检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些的诊断和生物学剂量测定等。





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