湖北染色体原位杂交-武汉贝科新肽

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    2024-7-3

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原位杂交是在分子生物学领域应用---广泛的实验技术之一,是在研究生物体发育过程中的一种---重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为in situ hybridization,其中in situ为拉丁文,原义是in its natural ition. 字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处杂交。原位杂交主要是基于以下这个主要原理:单链的dna或者rna只要他们的序列是互补的,即符合at,cg的碱基配对原则,那么这样的两条---链之间(dna-dna,dna-rna,rna-rna)就可以形成一个稳定的杂交复合体。





原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的---复性结合而使得组织细胞中的特------得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在---的原有位置上显示出来。经特定标记的核苷酸链为探针,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检dn---段或mrna进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检---的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mrna在胞质中的表达。





原位杂交第三天

1)        用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液,染色体原位杂交,放置摇床上25分钟,然后用1mlmabt置换,25分钟,再用1mlmabt溶液置换,一小时以上,后用1mlmabt溶液置换,25分钟。

2)        用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次,每次放置五分钟。

3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul bm purple ap substrate(底物,用之前加5mm左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。

4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用pbst洗两三次后加上4%---固定,拍照。

6)4c冰箱保存。







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