






在ishh,整个实验周期是比较长的,实验程序也比较繁杂,而杂交在ishh整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中---探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此,杂交是ishh中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上,加盖硅化的盖玻片,防止孵育过程中的高温(50℃左右)导致杂交液的蒸发。为---杂交所需的湿润环境,可将其放在盛有少量5×ssc或2×ssc(standard saline citrate, ssc)溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同,所不同的是加入了标记的---探针和---葡聚糖。

杂交 (1) 盛有2×ssc的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%---胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。

荧光原位杂交(fish)技术具有以下优点:
可多重染色:利用不同的荧光染料标记不同的探针,可以实现多重荧光原位杂交,动物组织原位杂交,从而同时检测多个序列,提高实验效率了。
高度---性和性:fish技术不仅可以用于研究已知基因或序列的染色体定位,还可以用于未基因或遗传标记及染色体畸变的研究,在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。
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