贝科新肽-原位杂交技术咨询-原位杂交

一. 原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的pbst溶液，原位杂交，放置5分钟。

2） 置换成30％的pbst溶液，放置5分钟

3） 置换成pbst溶液，放置5分钟，荧光原位杂交技术，重复一次

4） 置换成4％---的pbs溶液固定20分钟

5） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。

 蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，荧光原位杂交，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用pbst溶液轻洗，在pbst中放置5分钟。

3） 用4％---的pbs溶液固定20分钟，室温。

4） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。

荧光原位杂交（fish）技术具有以下优点：

高特---：荧光探针的合成是定向的，原位杂交技术咨询，---了杂交过程的特---，可以有效地降低非特---杂交和背景干扰。

高灵敏度：荧光信号的检测比性信号的检测更灵敏，可以检测出低拷贝数的dna序列，甚至可以检测单个基因序列。

快速简便：fish技术操作简便，杂交过程可以在数小时或数天内完成，而且不需要过于复杂的设备，便于在实验室开展。

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，fish）是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子（reporter molecule）结合，杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料.fish的基本原理是将dna（或rna）探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示中期分裂相，还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.



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